家禽支原體的生物學(xué)特性及其獸醫(yī)臨床防控
支原體又稱霉形體,是一類無細(xì)胞壁的細(xì)菌,整個細(xì)胞菌體柔軟,呈現(xiàn)高度多形性,可通過細(xì)菌濾器。支原體能在無細(xì)胞的人工培養(yǎng)基中生長繁殖,含有DNA和RNA,以二分分裂或芽生方式繁殖;廣泛分布于污水、土壤、植物、動物和人體中,營以腐生、共生或寄生,常污染實驗室的細(xì)胞培養(yǎng)及生物制品。目前認(rèn)為有30多種對人或畜禽有致病特性。霉形體在分類上屬柔膜體綱,其中霉形體屬及脲原體屬是獸醫(yī)學(xué)的主要研究對象。禽的霉形體有多種,如禽敗血霉形體、滑液霉形體、火雞霉形體、雞霉形體、鴨霉形體、鴿霉形體、鴿口霉形體等等。對禽具有明顯致病性的霉形體主要是禽敗血霉形體、滑液霉形體和火雞霉形體三種。
?
一、禽敗血霉形體的生物學(xué)特性
禽敗血霉形體又名雞毒霉形體、雞敗血支原體等。是引起雞和火雞等多種禽類慢性呼吸道病或火雞傳染性竇炎的病原,從雞、火雞、雉雞、珍珠雞、鵪鶉、野雞、鷓鴣、鴨、鴿、矮腳雞、孔雀、麻雀等10多種禽類均可分離到本菌。
(一)形態(tài)??菌體通常為球形(直徑0.2-0.5um)、卵圓形或梨形,細(xì)胞的一端或二端具有“小泡”極體,該結(jié)構(gòu)與菌體的吸附性有關(guān)。以姬姆薩或瑞氏染料著色良好,革蘭氏染色為弱陰性。
(二)培養(yǎng)及生化特性???需氧和兼性厭氧,對營養(yǎng)要求較高,在含馬血清或滅活雞、豬血清的培養(yǎng)基中生長良好,一般常用牛心浸出液培養(yǎng)基,用前加入10%-20%馬血清,為了抑制雜菌的生長需加入醋酸鉈(1:4000倍)和青霉素1000U/ml,調(diào)PH7.8-8.0。在液體培養(yǎng)基中加酚紅為指示劑,固體培養(yǎng)基中加1.0%-1.5%瓊脂。
在液體培養(yǎng)基中,37℃經(jīng)2-5d的培養(yǎng)物可呈現(xiàn)輕度渾濁乃至均等渾濁,在固體培養(yǎng)基上經(jīng)3-10d,可形成圓形表面光滑透明、邊緣整齊、露滴樣小菌落,直徑約0.2-0.3m,菌落中央有顏色較深且致密的乳頭狀突起。
生長于固體培養(yǎng)基上的菌落,在37℃可吸附雞的紅細(xì)胞、氣管上皮細(xì)胞、HeLa細(xì)胞等,此吸附作用可被相應(yīng)的抗血清所抑制,吸附的受體可被神經(jīng)氨酸酶所破壞。
在5-7d齡雞胚卵黃囊內(nèi)繁殖良好,并可使雞胚在接種后5-7d內(nèi)死亡,病變表現(xiàn)為胚體發(fā)育不良,水腫、肝腫大、壞死等,死胚的卵黃及絨毛尿膜中含本菌量最高。
(三)致病特性???本菌主要感染雞和火雞,引起慢性呼吸道病(CRD)。亦可感染珍珠雞、鴿、鷓鴣、鵪鶉及野雞等。病原體存在于病雞和帶菌雞的呼吸道、卵巢、輸卵管和精液中,帶菌雞胚可垂直傳遞給后代,公雞可通過交配將病傳遍全群,雞群一且染病即難以徹底根除。火雞較雞易感。雛雞比成雞易感,成雞常無明顯臨床癥狀,應(yīng)激因子及其他呼吸道病原微生物以及雞新城疫弱毒株的協(xié)同作用,使病情惡化、癥狀明顯。大腸桿菌特別是O78、O2、O1株繼發(fā)感染時,可引起特征性的肝包膜炎、心包炎以及氣囊炎。
具有神經(jīng)毒素,用本菌S6株接種于雛火雞,可出現(xiàn)腦動脈炎結(jié)節(jié),并產(chǎn)生運(yùn)動失調(diào)、麻痹,應(yīng)激死亡。經(jīng)火雞或雛雞氣管、氣囊接種,可引起竇炎、氣管炎、氣囊炎。附關(guān)節(jié)或腳掌接種則易引起腿鞘炎。
病雞康復(fù)后具有一定的免疫力。血清抗體雖在試管內(nèi)可抑制本菌的生長,但不能產(chǎn)生被動免疫。弱毒菌苗形成免疫需時長,免疫力不堅強(qiáng),且接種后一段時間內(nèi)不能使用抗菌藥,易發(fā)生其他細(xì)菌病,滅活苗效果也不理想。
(四)實驗室診斷???無細(xì)胞的特殊培養(yǎng)基分離不易成功,雞胚的分離率也不高,且非病性霉形體繁殖快,故很少采用病原分離和鑒定來診斷CRD,血清學(xué)試驗可準(zhǔn)確,快速診斷。
血清學(xué)診斷一般常用的方法有平板凝集試驗、試管凝集試驗,血細(xì)胞集抑制試驗等。多采用抽樣檢查法,一旦檢出血液中本菌抗體陽性雞,即可作為整個雞群污染的定性指標(biāo),判斷為陽性雞群。
病原體分離可取氣管、氣囊、肺、眶下竇滲出液,活體可從后胸氣囊處打一個小孔,以棉拭子擦拭。為了提高分離率可在培養(yǎng)基中加入一定量的雞血清和雞肉湯。用在平板上的菌落中進(jìn)行紅細(xì)胞吸附試驗,取0.25%雞紅細(xì)胞液滴于瓊脂培養(yǎng)物表面,置15min,傾去紅細(xì)胞液,用生理鹽水輕洗2-3次,低倍鏡檢查,可見菌落表面有多量紅細(xì)胞。此種吸附可被相應(yīng)的抗血清所抑制。
二、火雞霉形體的生物學(xué)特性
是火雞的一種病原體,經(jīng)蛋傳遞,引起孵化率下降、雛火雞氣囊炎、骨畸形。液體培養(yǎng)的菌體呈球狀,直徑約0.4um,有時單在,雙球或成小叢排列。
兼性厭氧,最適生長溫度為37-38℃,在含10%-20%馬血清和5%酵母滲出物的培養(yǎng)基上生長良好。在瓊脂培養(yǎng)上培養(yǎng)2-3d,可形成扁平、中心粗糙的微小菌落,直徑20-40um。初代分離時菌落中心的乳頭不明顯,但實驗室繼代株呈明顯的乳頭狀。初代分離時用固體培養(yǎng),在液體培養(yǎng)基中很難生長。
在含2%馬紅細(xì)胞的火雞肉湯瓊脂上,能溶解馬紅細(xì)胞。不吸附和凝集禽類紅細(xì)胞。
在空氣中可存活6h以上,在PH8.4-8.7的肉湯中可存活25-30d,瓊脂培養(yǎng)基上的培養(yǎng)物在室溫中可存活最少6d。瓊脂上的菌落搗碎加入3%蔗糖溶液,放-20~-70℃可保存2個月以上。瓊脂斜面培養(yǎng)物滲以肉湯,放-30℃中可保存2年,凍干物培養(yǎng)物可保存5年以上。對藥物的敏感性與禽霉形體相似。
確診應(yīng)進(jìn)行病原分離,可用滅菌棉拭子從泄殖腔取病料,插入含青霉素2000IU/ml、1%醋酸鉈50ul/ml及多黏菌素1ul/ml?的肉湯中培養(yǎng)。分離物應(yīng)作生化鑒定和血清學(xué)試驗,與禽的其他霉形體區(qū)別。血清學(xué)試驗可用平板凝集試驗,試管凝集試驗,生長抑制試驗或免疫熒光試驗。
三、滑液囊霉形體的生物學(xué)特性
是引起雞和火雞傳染性滑液囊炎的病原,并可通過蛋傳遞,臨床主要表現(xiàn)為關(guān)節(jié)炎。病原多呈球狀或球桿狀,比禽敗血霉形體稍小,直徑約0.2-0.4um。營養(yǎng)要求比禽敗血霉形體更高,培養(yǎng)需加10%豬血清,在含雞血清或雞肉湯的培養(yǎng)基需添加0.01%煙酰胺腺嘌呤核甘酸或煙酰胺方能生長。在瓊脂培養(yǎng)基面可形成中,37℃經(jīng)3-7d可形成“荷包蛋”樣菌落,直徑0.10-0.30mm,培養(yǎng)至10d以上在培基表面可形成結(jié)晶狀薄膜。能在5-7日齡的雞胚中繁殖,能致死雞胚,并呈現(xiàn)雞水腫、出血、肝、脾、腎腫大及壞死病變。能在雞腎和雞氣管細(xì)胞上增殖。
在pH6.9以下時不穩(wěn)定,對39℃以上的溫度敏感,在-63℃中可存活7年,-20℃中存活2年,對氯霉素、四環(huán)素、鏈霉素等敏感。
雞和火雞是天然宿主。人工接種雉和鵝也可感染,兔、豚鼠、小鼠、豬、羔羊等不染。
實驗室診斷可采取急性病雞的關(guān)節(jié)滲出液,肝、脾等為材料,以營養(yǎng)肉湯1:10倍稀釋,初代分離時最好先接種于雞胚的卵黃囊內(nèi),待雞胚出現(xiàn)典型病變并收獲卵黃囊、尿囊液或羊膜,將其分別種于含10%豬血清的0.01%NAD培養(yǎng)基,如果生長即可作為初步診斷。尚可用落菌壓片并進(jìn)行熒光抗體、酶標(biāo)抗體檢查或生長抑制試驗進(jìn)行鑒定。
四、抵抗力和獸醫(yī)臨床防控
禽敗血霉形對理化因素的抵抗力不強(qiáng)。對紫外線敏感,陽光直射便迅速喪失活力。一般常用的化學(xué)消毒劑均能迅速將其殺死,加熱50℃20min即可滅活。在肉湯培養(yǎng)物中-30℃能存活2-4年,經(jīng)低溫凍干后在-4℃能存活7年,在卵黃中37℃能存活8周,在孵化的雞胚中45.6℃經(jīng)12-24h可被滅活。對泰萬菌素、泰樂菌素、紅霉素、螺旋霉素、放線菌素D、絲裂霉素最為敏感,對四環(huán)素、金霉素、土霉素、鏈霉素、林可霉素次之,但易形成耐藥菌株。對青霉素、多黏菌素、卡那霉素、新霉素和磺胺類藥物有抵抗力。當(dāng)前獸醫(yī)臨床的主要治療和控制措施如下:
?
方案措施一:5%酒石酸泰萬菌素預(yù)混劑。混飼,以本品計,每200g拌料100kg,連用7天。
?
方案措施二:50%鹽酸土霉素可溶性粉。混飲,以本品計,每50g兌水100kg,連用3-5天。
?
?
